Pembuatan Medium Potato Dextrose Agar (PDA) secara sederhana

1. Tujuan : mampu membuat medium PDA dengan cara yang benar

2. Alat dan bahan

Alat:

a. Timbangan h. Pengaduk n. Labu erlenmeyer

b. Baskom plastik i. Hot plate o. Pipet ukur

c. Pisau j. Gelas ukur p. Inkubator

d. Talenan k. Tabung reaksi/botol contoh

e. Beaker glass l. Cawan petri (petridish)

f. Saringan/kain m. Autoclave saring

Bahan:

a. Kentang (kupas) : 200 gram

b. Dekstrose/glukose : 20 gram

c. Agar-agar (putih) : 7 gram (1 bungkus)

d. Aquades : 1 liter

e. Kertas perkamen : 2 lembar

f. Kapas

g. Karet/benang kasur

3. Langkah Kerja:

a. Kupas kentang secukupnya, cuci hingga bersih dan potong kecil-kecil hingga berbentuk dadu.

b. Timbang potongan kentang sebanyak 200 gram.

c. Masak dengan menggunakan air sebanyak 1 liter hingga cukup lunak, tetapi jangan terlalu masak/hancur, hingga diperoleh kaldu kentang yang berwarna kekuning-kuningan.

d. Saring dengan menggunakan saringan/kain saring halus, jangan sampai hancuran kentang tercampur dalam kaldu kentang (larutan hasil penyaringan).

e. Tambahkan tepung agar-agar dan dekstrose/glukose ke dalam kaldu kentang.

f. Ukurlah jumlah larutan hasil saringan tersebut, dan tambahkan aquades sehingga diperoleh volume 1 liter.

g. Didihkan kembali larutan tersebut hingga agar-agar dan dekstrose/glukose larut seluruhnya.

h. Tuangkan medium tersebut ke dalam tabung reaksi sesuai kebutuhan, seperti terlihat pada tabel berikut:

Agar miring 4 ml Tabung reaksi

Agar tusuk 6 ml Tabung reaksi

Cawan tuang 12 ml Tabung reaksi

(agar cawan) 100-200 ml Labu erlenmeyer

i. Tutuplah tabung reaksi/erlenmeyer dengan menggunakan kapas dan kertas perkamen, kemudian diikat dengan menggunakan karet/benang kasur.

j. Siapkan tabung reaksi berisi aquades sebanyak 9 ml sebanyak 10 buah yang ditutup dengan kapas dan kertas perkamen untuk tiap kelompok.

k. Sterilisasikan media ke dalam autoclave pada suhu 121^oC, tekanan 15 psi selama 15-20 menit.

l. Keluarkan semua bahan yang disterilisasi.

m. Dinginkan dalam kondisi miring untuk tabung reaksi yang akan dibuat/dipersiapkan sebagai agar miring, dan kondisi tegak untuk agar tusuk hingga medium tersebut membeku.

n. Untuk membuat medium dalam cawan petri, tabung yang berisi 12 ml medium dimasukkan ke dalam penangas air (waterbath) pada suhu 50^oC + 5 menit. Tuangkan medium ke dalam cawan petri steril secara aseptik hingga merata ke seluruh permukaan cawan dan biarkan hingga dingin dan membeku.

o. Simpan dalam lemari pendingin bila medium tersebut belum digunakan.

Selanjutnya lakukan pekerjaan berikut :

Siapkan dua buah medium agar miring/tegak/cawan ke dalam tabung reaksi yang Anda buat. Bukalah tutup/sumbat kapas dan kertas perkamen pada salah satu medium dalam tabung reaksi dan biarkan minimal 10 menit pada beberapa tempat yang berbeda pada masing-masing kelompok, kemudian tutuplah kembali seperti semula. Berilah tanda pada tabung reaksi tersebut untuk membedakan dengan medium agar lain yang tidak dibuat. Simpan medium tersebut ke dalam inkubator pada suhu 30^oC selama 2-3 hari. Amati dan gambar serta bahas apa yang terjadi dengan medium tersebut bersama kelompok Anda.